1992年,Wang及其同事發(fā)現(xiàn)并且克隆了一種新的細(xì)胞膜型分子,當(dāng)時將其命名為Tactile（T cell activation increased late expression）。

   隨后,在人類白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組會議上將該分子命名為CD96。CD96分子表達(dá)于正常T細(xì)胞、T細(xì)胞克隆以及某些轉(zhuǎn)化的T細(xì)胞系。外周血T細(xì)胞表達(dá)低水平的CD96分子,活化后其表達(dá)明顯上調(diào),并在刺激后第6~9天表達(dá)達(dá)到高峰值。在同種異體抗原刺激的條件下,NK細(xì)胞上CD96的表達(dá)也發(fā)生上調(diào)。CD96屬于免疫球蛋白超家族,胞膜外區(qū)包含3個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域,共有15個N-連接糖基化位點(diǎn),還有1個高度O-連接糖基化富含絲/蘇/脯氨酸殘基的莖狀結(jié)構(gòu)域,跨膜區(qū)有24個氨基酸殘基,胞質(zhì)區(qū)含44個氨基酸殘基,并有一個富含堿性/脯氨酸的區(qū)域。自克隆CD96分子后的十多年間,由于不清楚其配體,該分子的研究無明顯進(jìn)展。直到2004年,Fuchs及其同事發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞可通過CD96識別PVR（CD155）,促進(jìn)NK細(xì)胞對表達(dá)CD155靶細(xì)胞的黏附,介導(dǎo)NK細(xì)胞對靶細(xì)胞表面上CD155的內(nèi)化作用。由于PVR（CD155）高表達(dá)于某些腫瘤細(xì)胞,這一受體系統(tǒng)可能在NK細(xì)胞對腫瘤的識別和殺傷中起重要作用。然而,迄今為止對CD96表達(dá)和功能的認(rèn)識還十分有限。 在本課題中,我們通過對CD96分子的生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)CD96的同源分子有CD166、CD113、CD226和CD86，預(yù)測CD96分子的配體結(jié)合位點(diǎn)為Y177、T186、T245、T246和V249，可結(jié)合配體上GLU-LYS-VAL保守序列。也發(fā)現(xiàn)CD96分子的胞質(zhì)區(qū)有1個高度保守的ITIM模體，跨膜區(qū)有1個能結(jié)合跨膜型接頭分子帶正電的精氨酸殘基。這些結(jié)果為進(jìn)一步探討CD96分子的功能及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑提供了重要的啟示。 采用PHA刺激上調(diào)人T淋巴細(xì)胞系HSB-2細(xì)胞CD96分子的表達(dá)，用RT-PCR成功從該細(xì)胞中克隆出CD96分子胞膜外區(qū)免疫球蛋白V樣結(jié)構(gòu)域的cDNA基因，并將該cDNA插入pCDM18-T載體中，經(jīng)過測序證實(shí)該序列正確。從pCD96-D1-T載體中通過雙酶切得到CD96-D1 cDN段，將該cDNA插入到載體pCDM7中構(gòu)建出pCDM7-CD96-D1真核表達(dá)載體。用脂質(zhì)體將該載體的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，表達(dá)出CD96-D1-Fc融合蛋白。用抗-Fc mAb親和層析柱對CD96-D1-Fc融合蛋白進(jìn)行純化。以純化后的CD96-D1-Fc融合蛋白為免疫原制備了17株抗人CD96-D1 mAbs。用ELISA、FCM、Western Blot等方法對這些抗體進(jìn)行了鑒定。按常規(guī)方法制備腹水，用飽和硫酸銨和陰離子交換層析法對抗CD96-D1 mAbs進(jìn)行純化。用過碘酸鈉氧化法制備辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗CD96-D1 mAbs，以建立測定可溶型CD96的夾心elisa試劑盒。從抗CD96-D1 mAbs和HRP標(biāo)記的CD96-D1 mAbs中篩選出*佳抗體配對，即包被抗體采用抗CD6-D1-No.5 mAb，檢測抗體采用HPR標(biāo)記的抗CD96-D1-No.13 mAb。對包被抗體和HPR酶標(biāo)檢測抗體的工作濃度進(jìn)行優(yōu)化，建立了測定可溶型CD96的夾心ELISA試劑盒。該試劑盒的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性均令人滿意，為可溶型CD96的研究奠定了重要基礎(chǔ)。我們對CD96在多種造血、非造血細(xì)胞系以及正常人PBmAb，檢測抗體采用HPR標(biāo)記的抗CD96-D1-No.13 mAb。對包被抗體和HPR酶標(biāo)檢測抗體的工作濃度進(jìn)行優(yōu)化，建立了測定可溶型CD96的夾心ELISA試劑盒。該試劑盒的靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性均令人滿意，為可溶型CD96的研究奠定了重要基礎(chǔ)。 我們對CD96在多種造血、非造血細(xì)胞系以及正常人PBMC中的表達(dá)情況進(jìn)行了系統(tǒng)研究,發(fā)現(xiàn)CD96在造血和非造血細(xì)胞系中表達(dá)十分廣泛。 CD96也表達(dá)于正常人CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、單核細(xì)胞和NK細(xì)胞。在PHA刺激后，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞上CD96表達(dá)明顯上調(diào)，證實(shí)CD96是一種活化表達(dá)增加的分子。但PHA對單核細(xì)胞CD96的表達(dá)上調(diào)作用不十分明顯，提示不同細(xì)胞上CD96分子的表達(dá)調(diào)節(jié)具有不同特點(diǎn)。 對CD96分子對細(xì)胞因子分泌的影響也進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)用CD96-DI mAb交聯(lián)正常人PBMC細(xì)胞上CD96受體，能促進(jìn)PBMC細(xì)胞TNF和IL-10的分泌。單獨(dú)CD96-D1 mAb的刺激并不能始動IL-2的分泌，但CD96-D1 mAb能促進(jìn)同種異體抗原誘導(dǎo)的IL-2分泌。另外，CD96-D1 mAb交聯(lián)CD96對IFN-γ和IL-4的分泌未發(fā)生明顯影響。這些結(jié)果提示CD96分子在免疫調(diào)控、炎癥反應(yīng)、T細(xì)胞增殖和分化中可能發(fā)揮著重要作用。對CD96介導(dǎo)殺傷作用也進(jìn)行了研究。在CD96-D1 mAb介導(dǎo)的重導(dǎo)向殺傷實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，觀察到CD96-D1 mAb能介導(dǎo)MLC中反應(yīng)細(xì)胞對P815細(xì)胞的重導(dǎo)向殺傷。也發(fā)現(xiàn)CD96-D1 mAb能抑制MLC中反應(yīng)細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷，證實(shí)CD96為NK細(xì)胞的活化性受體，說明CD96胞膜外N-端免疫球蛋白V樣結(jié)構(gòu)域?yàn)閰⑴cCD96/CD155結(jié)合的主要結(jié)構(gòu)域。 CD96分子具有十分重要的生理功能，尤其是該分子參與NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷和黏附。本文研究了CD96結(jié)構(gòu)、表達(dá)和功能，對弄清其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和生理功能具有重要意義。

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