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點(diǎn)擊次數(shù)：16508 發(fā)布時間：2023/12/21 17:33:19
天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒(賴氏微板法)的參考范圍
產(chǎn)品簡介：
轉(zhuǎn)氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)的一組酶，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)舊稱谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝臟，以心肌含量，肝臟次之，AST 能夠催化天門冬氨酸和 a-酮戊二酸的氨基轉(zhuǎn)移作用，形成谷氨酸和草酰乙酸。天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒(賴氏微板法)其檢測原理是 AST 催化天門冬氨酸與α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，其反應(yīng)公式如下：
L-天門冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷氨酸
二硝基苯肼與α-酮酸反應(yīng)生成相應(yīng)的二硝基苯腙，在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異，通過酶標(biāo)儀檢測在 500-520nm 處差異，以等摩爾濃度計算出丙酮酸的生成量，進(jìn)而計算酶的活性。100T 該檢測試劑盒可檢測 50 個樣品(不含標(biāo)準(zhǔn)品)，該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
自備材料：
1、蒸餾水或去離子水
2、離心管、水浴鍋或恒溫箱
3、96 孔板、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃
保存 1 個月有效，用于 AST/GOT 的檢測。
②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存 1 個月
有效，用于 AST/GOT 的檢測。
③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計
算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 AST/GOT 含量。
2、配制 AST 顯色基液(1×)：取 AST 顯色基液(5×)一份加入蒸餾水 4 份稀釋即可使用。
3、制作 AST 標(biāo)準(zhǔn)曲線：取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn) 1 支，準(zhǔn)確加入丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 1ml，充分混勻，即配制成丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L)，4℃保存?zhèn)溆�。臨用前，取適量的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn) (100mmol/L)，按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L)：丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1：49 的比例混合，即為丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)工作液-丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(2mmol/L)，按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。設(shè)定平行檢測孔，求平均值。
4、AST 酶促反應(yīng)：按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免
產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。
5、AST 測定：混勻，室溫放置 5min，以蒸餾水調(diào)零，酶標(biāo)儀 505nm 處測定對照孔、測定孔的吸光度(即為 A 對照、A 測定)。
計算：以標(biāo)準(zhǔn)活力單位(24、61、114、190)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)
準(zhǔn)曲線，測定孔的吸光度減去對照孔的吸光度的差值(即 A 測定-A 對照)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得AST活力單位。
參考范圍：成年健康人血清 AST：8~28 卡門單位/ml
注意事項：
1、 二硝基苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出，應(yīng)棄用。
2、 AST 顯色基液(5×)有一定腐蝕性，請小心操作。
3、 AST Assay buffer 使用前應(yīng) 37℃提前孵育 5min。
4、 由于賴氏法的特點(diǎn)，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時每個點(diǎn)做 3 孔的重復(fù)測定，求出各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度均值，減去“0"號管吸光度均值后，對照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、 血清中 AST 活性在室溫可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 個月。
6、 成批樣本測定時，一般無需每份樣本都做自身血清對照，以試劑空白代替即可。
7、 對于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測，復(fù)測時每份樣本都應(yīng)做自身血清對照。
8、 嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會引起測定孔的吸光度增高，因此檢測該類樣本時應(yīng)做自身血清標(biāo)本對照。
9、 當(dāng)樣本的酶活力大于 190 卡門單位時，應(yīng)將樣本進(jìn)行 5~10 倍稀釋后再行測定。
10、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：6 個月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。
天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒(賴氏微板法)的參考范圍
原創(chuàng)作者：上海信帆生物科技有限公司
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