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點擊次數(shù)：45 發(fā)布時間：2024/10/24 10:14:18
血涂片肺泡灌洗液和骨髓涂片制備的制作方法
信帆生物提供各類染色實驗服務(wù)！
樣本準備方法及送樣運輸要求(為保證染色成功率，血液、肺泡灌洗液、骨髓樣本建議客戶按以下方法自行涂片固定后送樣):
1.涂片的制作方法:
(1)取新鮮血液(若用抗凝管收集的血液，放置一般不要超過24h，否則血液中白細胞的數(shù)量以及種類會明顯減少),選用干凈的粘附玻
1.1 血涂片制備:
片，用移液槍吸取10ul的血液，滴加在玻片的一側(cè)(一般都是磨砂對側(cè))。
(2)再取一片輔助玻片(也可選用蓋玻片，依據(jù)個人手的力道習(xí)慣選擇)，以45°角將其寬邊靠近血液，血液沿著接觸邊緣向兩邊暈
開，當兩邊都到達邊緣時，輕輕地穩(wěn)健且勻速地推向磨砂面一側(cè)，進行涂片，然后快速果斷地拿走載玻片，可見涂片首尾分明，厚薄均
勻。(一般情況下，涂抹速度力道適中的話，取走玻片時載玻片上的血幾乎無殘留，且涂抹出的血涂片無明顯細胞破碎，變形。在顯微
鏡下可觀察到細胞呈單個緊密排列，整體比較均勻。)
(3)自然晾干后，用甲醇浸泡固定15min，自然晾干后4C保存運輸。
1.2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制備:
(1)取細胞懸液，2800r4℃離心5min去上清。若沉淀紅色較多，則需要用紅細胞裂解液(G2015)裂解紅細胞。細胞沉淀加入紅細
胞裂解液200ul，渦旋混勻，放在冰上裂解2min后加入1mlPBS終止裂解。2800r4℃高心5min去上清后加PBS重懸。若沉淀紅色不
多，則不需要裂解紅細胞，直接棄上清液，加PBS重懸。根據(jù)細胞沉淀量對應(yīng)加入PBS:
①若肉眼觀察無明顯細胞沉淀，直接加入50ul PBS，用移液槍吹打混勻后，涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cmx2
cm的橢圓);
②若細胞沉淀量為綠豆大小，加入200ulPBS，用移液槍吹打混勻后，吸取50ul，涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中(3
cmx2cm的橢圓);
③若細胞沉淀量很多，黃豆大小或更大，加入1mlPBS,用移液槍吹打混勻后，吸取150ul，涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的大
圓圈中(長邊約5cm，短邊約2cm的橢圓)。在顯微鏡下觀察細胞量的多少，若還是過厚，再用PBS對倍稀釋該細胞懸液，直
至在顯微鏡下觀察到細胞量涂布均勻。
(2)用移液槍將細胞懸液鋪滿整個圓圈，涂片放置自然晾干(因細胞未經(jīng)固定，不可通過烘箱加快晾干)。
(3)將晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min，自然風(fēng)干，4℃保存運輸。
血涂片肺泡灌洗液和骨髓涂片制備的制作方法
原創(chuàng)作者：上海信帆生物科技有限公司
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