ACTH放射免疫實驗檢測服務(wù)找上海信帆生物
ACTH是由垂體前葉細胞分泌的39個氨基酸組成的直鏈多肽,分子量4500,在循環(huán)中的半衰期僅為10~25min。ACTH的生理作用為促進腎上腺皮質(zhì)增生、合成和分泌皮質(zhì)類固醇,同時也促時腎上腺素、生長激素合成。ACTH的合成和分泌受下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、腎上腺皮質(zhì)激素以及加壓素的調(diào)節(jié)。我們利用ACTH的18~39片段的特異抗體,建立了特異、靈敏的測定血漿、體液中ACTH18-39片段的放射免疫分析方法。該抗體也能同組織、細胞切片中特異的ACTH和體外純化的ACTH特異結(jié)合,用于臨床組織化學(xué)診斷ACTH水平變化。因此該方法適用于腎上腺皮質(zhì)功能亢進、異位ACTH綜合征、腎上腺腺瘤上腺皮質(zhì)功能減退等諸多臨床疾病時血漿ACTH水平的監(jiān)測。
1.激素類檢測:⑴在垂體性腺激素:卵泡刺激素(FSH),黃體生成激素(LH),睪丸酮(T),雌二醇(E2),孕酮(P),催乳素(PRL),人生長激素(HGH),人絨毛膜促性腺激素(HCG),人胎盤催乳素(HPL)等。⑵甲狀腺腺激素。
2.腫瘤類檢測:甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),糖蛋白抗原(CA19-9),糖蛋白抗原(CA-125,CA15-3),β2微球蛋白(β2-MG),鐵蛋白放射免疫分析(SF),前列腺特意抗原(PSA)。
3.放射受體分析:受體是存在于細胞表面、胞漿或細胞核內(nèi)的生物活性物質(zhì),其功能是和細胞外的信息分子(配體)特異性結(jié)合,將信息轉(zhuǎn)變?yōu)樯镄?yīng)。放射受體分析(radioreceptorassay,RRA)或受體的放射配體結(jié)合分析(radioligand binding assay,RBA)是建立在放射性標記配體與受體之間的結(jié)合反應(yīng),它是目前對受體分子進行定量和定位分析研究的靈敏、可靠的一項技術(shù)。臨床上[5]*常見的就是TRAb放射受體分析,血清中TRAb對甲亢與甲減的病因診斷有重要的意義。此外,在生物設(shè)計、藥物作用機理、生物效應(yīng)及疾病的病因探討、診斷和治療等方面的應(yīng)用已有較大發(fā)展。
放射微生物分析法(radiomicrobiologic assay)以特異微生物作為結(jié)合劑,如用某種微生物測定葉酸。
糖皮質(zhì)激素對下丘腦及垂體前葉起著長負反饋作用,抑制CRH及ACTH的分泌。在生理情況下,下丘腦、垂體和腎上腺三者處于相對的動態(tài)平衡中,ACTH缺乏,將引起腎上腺皮質(zhì)萎縮、分泌功能減退。ACTH還有控制本身釋放的短負反饋調(diào)節(jié)。
ACTH口服后在胃內(nèi)被胃蛋白酶破壞而失效,只能注射應(yīng)用。血漿t1/2為15分鐘。它在正常人的血漿濃度,晨8時為22pg/ml,晚10時為9.6pg/ml。其主要作用是促進糖皮質(zhì)激素分泌,但只有在皮質(zhì)功能完好時方能發(fā)揮治療作用。一般在給藥后2小時,皮質(zhì)才開始分泌氫化可的松。臨床用于診斷腦垂體前葉-腎上腺皮質(zhì)功能水平及長期使用皮質(zhì)激素的停藥前后,以防止發(fā)生皮質(zhì)功能不全。由于ACTH易引起過敏反應(yīng)(因臨床應(yīng)用制劑來自牛、羊、豬垂體),現(xiàn)已少用。
標準ACTH 溶液:使用前用緩沖液1ml溶解,混勻。2~8℃避光保存,在標識的有效期內(nèi)穩(wěn)定,濃度分別為0、5、15、45、135、405pg/ml。
125I- ACTH溶液:使用前用緩沖液(100管10.5ml溶解,50管5.5ml
溶解),混勻。如一次加樣超過100管,兩瓶混合后使用;2~8℃避光保存標識的有效期內(nèi)穩(wěn)定。
兔抗-ACTH 抗血清:使用前用緩沖液(100管10.5ml溶解,50管5.5ml
溶解),混勻。如一次加樣超過100管,兩瓶混合后使用;2~8℃避光保存標識的有效期內(nèi)穩(wěn)定。
驢抗兔免疫分離試劑:1瓶,液體,2~8℃保存,在標識的有效期內(nèi)穩(wěn)定。加樣前必須搖勻!
取靜脈血2ml,注入含10%EDTA二鈉30ul的試管中,混勻4℃,3000rpm離心10 min,分離血漿,待測;如不立即測量,可將樣本密封后,置于2~8℃或-20℃儲存?zhèn)錅y,2~8℃保存不應(yīng)超過48小時,-20℃保存不超過2個月。冰凍樣品測定前,
2.手工作圖或計算器處理:
1).百分結(jié)合率計算:設(shè)S0管計數(shù)為B0,各標準管或樣品管計數(shù)為B,非特異管計數(shù)為NSB,則百分結(jié)合率計算公式如下:B/ B0=(B-NSB)/( B0-NSB)×100%
2).logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:
logit=ln(B/ B0)/(1-B/ B0)
3)手工作圖:以標準濃度取log值為橫坐標,對應(yīng)的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標,對應(yīng)的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線(理想化時是一條直線)。根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。注意:如果使用普通坐標紙,查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是*后的濃度值。
4).計算器處理;使用有線性擬合功能的計算器,可以比較方便地計算出樣品濃度值,具體操作方法請查閱計算器的使用說明書。
本測定盒主要技術(shù)指標
1.標準范圍:5—405pg/ml
2.靈敏度:<5pg/ml
3.批內(nèi)變異系數(shù)(CV):<10%;
批間變異系數(shù)(CV):<15%
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