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通用名：碘[ 125I]- 三碘甲腺原氨酸放射免疫分析藥盒

漢語(yǔ)拼音：Dian[ 125I] Sandianjiaxianyuan＇ansuan Fangshemianyifenxi Yaohe

英文名:Iodine[ 125I]- 3,3’, 5-Triiodothyronine Radioimmunoassay Kit

簡(jiǎn)稱：碘[ 125I] 三碘甲腺原氨酸 （T3）放免藥盒

[使用目的]

用于定量測(cè)定人血清（或血漿）中三碘甲腺原氨酸 （T3）的濃度。

[用途]

三碘甲狀腺原氨酸（T3）和甲狀腺素（T4），二者均為酪氨酸的碘化物，由甲狀腺分泌。

其中 T4在外周脫碘后，約 2／5 轉(zhuǎn)化為 T3（T3），3／5 轉(zhuǎn)化為反 T3（r T3），這一過(guò)程

是在肝內(nèi)完成的。肝細(xì)胞的微粒體和胞漿膜內(nèi)存在碘化甲狀腺素脫碘酶，其中 5ˊ－

脫碘酶催化 T4分解為高能的 T3, 5－脫碘酶催化 T4分解為無(wú)活性的 rT3。在肝細(xì)胞內(nèi)，

甲狀腺激素分布于細(xì)胞核、線粒體、微粒體和可溶性成分中，在這些部分中其含量水

平的高低變化依次為：可溶性成分﹥微粒體﹥線粒體﹥細(xì)胞核，且 T4﹥T3。肝臟是甲

狀腺素代謝、滅活的主要場(chǎng)所，也是甲狀腺素結(jié)合蛋白的合成部位，該結(jié)合蛋白可與

血清蛋白競(jìng)爭(zhēng)性攝取甲狀腺素，是肝臟攝取甲狀腺素的主要因素。血清中，甲狀腺素

絕大部分與蛋白質(zhì)結(jié)合，僅極少部分呈游離型，游離型甲狀腺素的多少與肝臟對(duì)甲狀

腺素的攝取量成正比。肝硬化時(shí)，甲狀腺素的代謝將必然受到影響。定量測(cè)定總 T3

含量，對(duì)評(píng)價(jià)甲狀腺功能狀態(tài)具有重要意義。

[試驗(yàn)原理]

本品采用了第二抗體＋聚乙二醇沉淀法放射免疫分析試驗(yàn)原理：含 T3的樣品和 125I 標(biāo)記

的 T3 與相應(yīng)的抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。反應(yīng)后加入二抗及 PEG，使免疫復(fù)合物

沉淀，離心，測(cè)沉淀物放射性強(qiáng)度。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣本中 T3的濃度。

[試劑主要組成成分]

1、T3標(biāo)準(zhǔn)品：

一套共 6 瓶，以不含 T3的人血清為基質(zhì)，用時(shí)輕輕搖勻，2～8℃冷存。

T3標(biāo)準(zhǔn)品濃度

A

B

C

D

E

F

（單位）

0

0.5

1.0

2.0

4.0

8.0

ng/mL

0

0. 8

1.5

3.1

6.2

12.3

nmol/L

2、質(zhì)控血清：兩瓶，0.5 ml／瓶 2～8℃冷存。

3、

抗 T3血清： 一瓶，藍(lán)色溶液，2～8℃冷存。

4、125I- T3標(biāo)記物： 一瓶，< 88.23 kBq/瓶，紅色溶液，2～8℃冷存。

5、

分離劑： 一瓶，綠色溶液，充分搖勻后使用，2～8℃冷存。

[儀器]

1、

γ－計(jì)數(shù)器

2、低溫離心機(jī)

樣本收集和保存：

110 微升人血清樣本。

采靜脈血 5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉(zhuǎn)／分離心，取其上清液，放置玻

璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-18℃~-25℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月。嚴(yán)重溶血、高濃度的脂類、膽紅素對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。

[使用前準(zhǔn)備]

試驗(yàn)前，恢復(fù)樣本至室溫，小心搖勻血清樣本。

[實(shí)驗(yàn)方法]

1、將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少 30 分鐘以上才可進(jìn)行操作；

2、取 60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào)，所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù)；

3、取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本 50µl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中；

4、每管均各加入 200µl 標(biāo)記物工作液；

5、除去 T、NSB 管以外的各管均各加入 200µl 抗體工作液，充分混勻；

6、37℃溫育 1.0 小時(shí)；

7、每管均各加入 500µl 分離劑后，充分混勻；

8、室溫放置 10~15 分鐘后，離心 3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液；

9、用 γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定各管放射性計(jì)數(shù)（CPM）。 推薦檢測(cè)時(shí)間: 1 分鐘

10、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。

操作流程(Assay Procedure)

（單位μL）

T

NSB

標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)

質(zhì)控品和人樣品（QC&Samples）

A(B0)

B

C

D

E

F

L

H

1

2

3

…..

標(biāo)準(zhǔn)品

A

50

50

標(biāo)準(zhǔn)品

B－F

50

50

50

50

50

質(zhì)控品和

人樣品

50

50

50

50

50

….

125I-T3

抗 T3血清

混勻，37℃水浴溫育 60 分鐘(Vortex ａnd Incubate 60 minute at 37℃)

分離劑

500

搖勻，室溫放置 10～15 分鐘，3500RPM 離心 20 分鐘（溫度低于 25℃）

Vortex，Centrifuge for 20 minutes at3,500 RPM （Below25℃）

吸去上清液 Aspirate the Supernate of the tubes

沉淀物計(jì)數(shù) 1 分鐘 Count for 1 minute

[實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意]

1、γ-計(jì)數(shù)器本底計(jì)數(shù)應(yīng)≤100CPM/分，效率應(yīng)≥75％；

2、加入放射性標(biāo)記物時(shí)，應(yīng)做好防護(hù)、小心謹(jǐn)慎，以避免造成放射性污染；

3、如果某一個(gè)樣本的測(cè)定值高于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，用零標(biāo)準(zhǔn)品以 1：2 或 1：4

的比例稀釋樣本后重新測(cè)試，測(cè)試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

[質(zhì)量控制]

200

200每次實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)至少采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保每次實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

的可靠性。

1、質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi)；

2、曲線方程應(yīng)采用佳擬合方式；

3、重復(fù)樣本的測(cè)定結(jié)果相差在 15％以內(nèi)。

如不能同時(shí)滿足以上條件，則此次試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行。

[測(cè)定結(jié)果的計(jì)算]

1、計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品（B~F）、質(zhì)控品和樣品與標(biāo)準(zhǔn)品 A 的比值（B/B0）;

2、劑量-反應(yīng)曲線按“對(duì)數(shù)劑量-結(jié)合率對(duì)數(shù)”（Log(dose)-Log(B/ B0))數(shù)學(xué)模型或四參

數(shù)數(shù)學(xué)模型擬合，通過(guò)每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的 B/B0和其濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；

3、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣本的濃度值，B/B0應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)的樣本及其濃度

[實(shí)驗(yàn)的局限性]

1、本品僅供體外診斷使用，只能用于人血清或血漿樣本的測(cè)定而不能用于其它體液樣

本；

2、通過(guò)其它方法得到的 T3值與本品測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。

[產(chǎn)品性能指標(biāo)]

1、靈敏度：

取藥盒中校準(zhǔn)試劑 A 點(diǎn)（0 劑量）作 20 平行管，求其均值 X 及偏差 SD，從劑量—反

應(yīng)曲線上查出與 X+2SD 相對(duì)應(yīng)的劑量值，確定為本藥盒的靈敏度（小檢出值），為

0.1ng/ml。

2、精密度：

精密度是質(zhì)量控制的基本參數(shù)，用批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)確定。要求批內(nèi)變

異系數(shù) < 10% ，批間變異系數(shù) < 15% 。

批內(nèi)變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品 C1、C2、C3 同時(shí)分別進(jìn)行多個(gè)復(fù)管一次測(cè)定中的

重復(fù)性，應(yīng)小于 10%。

C1

C2

C3

批內(nèi)變異系數(shù)

6.21%

5.04%

4.12%

批內(nèi)變異系數(shù)均小于 10%。

批間變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品 C1、C2、C3 在多次測(cè)定間的重復(fù)性，應(yīng)小于 15%。

B/B0×100 = 標(biāo)準(zhǔn)品或樣品(STD or Samples)(CPM)—NSB(CPM)

A 標(biāo)準(zhǔn)(STD)(CPM)—NSB(CPM)

×100C1

C2

C3

批間變異系數(shù)

8.98%

6.14%

5.02%

批間變異系數(shù)均小于 15%。

3、測(cè)定范圍：

采用零標(biāo)準(zhǔn)品添加高濃度的 T3,確定本試劑盒的測(cè)定范圍為 0～8 ng/ml

1、

正常參考值

0.6-2.1ng/mL(1.1-3.5nmol/L)

建議各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立本實(shí)驗(yàn)室的正常值，以上數(shù)據(jù)僅供參考。

[規(guī)格] 50 人份／盒、100 人份／盒

[儲(chǔ)藏]冷凍組份-20℃,冷藏組份 2～8℃。

[有效期] 1 個(gè)月

信帆生物供應(yīng)T3放免檢測(cè)試劑盒，提供T3放免代測(cè)服務(wù)