實惠又好用的黃曲霉毒素M1 ELISA檢測試劑盒，上海信帆生物供應黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA 檢測試劑盒，產品質量穩(wěn)定，適用面廣，大家有需要可隨時咨詢！
黃曲霉毒素M1(AFM1)ELISA 檢測試劑盒說明書
【概要】
黃曲霉毒素是類真菌的有毒代謝物，它們具有很強的致
癌性，主要存在于谷物、堅果以及動物飼料等相關產品中。黃
曲霉毒素M1 是黃曲霉毒素B1 羥基化代謝產物，也具有致癌
性。我國及許多國家規(guī)定牛奶及奶制品中黃曲霉毒素M1 的含
量不得超過0.5μg/kg；而歐盟的規(guī)定更加嚴格為0.05μg/kg。
AFM1 的檢測方法有高效液相（HPLC）、薄層色譜（TLC）
及酶聯免疫（ELISA）法。應用酶聯免疫試劑盒是檢測乳及乳
制品中AFM1 的快速篩選的方法之。
【適用范圍】
本試劑盒可定性、定量檢測乳及乳制品中的黃曲霉毒素
M1。
【試驗原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法，在酶標板微孔條上
預包被黃曲霉毒素M1 抗原，樣本中黃曲霉毒素M1 和此抗原
競爭結合抗黃曲霉毒素M1 抗體（抗試劑），同時抗黃曲霉毒
素M1 抗體與酶標二抗（酶標物）相結合，經TMB 底物顯色，
樣本吸光值與其所含黃曲霉毒素M1 的含量成負相關，對照標
準曲線，再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中黃曲霉毒
素M1 的含量。
【試劑盒組成】
1. 96 孔板（8 孔*12 條）
2. AFM1 標準溶液×5 瓶： （1.5mL/瓶）
0ng/mL, 0.05ng/mL, 0.15ng/mL, 0.45ng/mL, 1.35ng/mL
3. AFM1 酶標物1 瓶.................................................... ....6mL
4. AFM1 抗試劑1 瓶.........................................................6mL
5. 底物液1 瓶......................................................................6mL
6. 顯色液1 瓶......................................................................6mL
7. 終止液1 瓶......................................................................6mL
8. 濃縮洗滌液（20×）1 瓶...............................................20mL
9. AFM1 樣品稀釋液4 瓶....................................................80mL
注：48 孔型號試劑盒內容物數量、體積略有差別
【需要而未提供的設備及試劑】
－－－－酶標儀450nm
－－－－振蕩器
－－－－離心機
－－－－粉碎機
－－－－天平：感量0.01g
－－－－微量移液器：單道20L～200L、100L～1000L
┅┅乙腈
┅┅去離子水
【試劑配制】
1. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進行
稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。
2. 84%乙腈-水：取無水乙腈，用去離子水按84:16 體積比例
稀釋（84 份無水乙腈＋16 份水）。
【樣本處理步驟】
. 液態(tài)奶（稀釋倍數：1）
將含脂牛奶降溫至10℃以下，4000 轉/min 離心10min，
用吸管棄去上層脂肪層，下層牛奶液即為待測樣液。（脫脂牛
奶直接測定）。
二. 奶粉（稀釋倍數：3）
稱取5.0g 奶粉于100mL 三角瓶中，加入20mL 84%乙腈
水，振搖5min，過濾或4000r/min 下離心10min；取1mL 濾
液或上清液，于50℃下氮氣吹干或水浴揮干。加750uL AFM1
樣品稀釋液，充分混勻后即為待測樣液。
三. 發(fā)酵乳/奶油（稀釋倍數：3）
稱取5.0g 樣品于100mL 三角瓶中，加入20mL 乙腈，振
搖5min，過濾或4000r/min 下離心10min；取1mL 濾液或上
清液，于50℃下氮氣吹干或水浴揮干。加750uL AFM1 樣品
稀釋液和0.5mL 石油醚，振蕩混勻，4000r/min 下離心5min，
取下層清液即為待測樣液。
四. 煉乳/乳酪（稀釋倍數：3）
稱取5.0g 樣品于100mL 三角瓶中，加入15mL 84%乙腈
水，振搖5min，過濾或4000r/min 下離心10min；取1mL 濾
液或清液，于50℃下氮氣吹干或水浴揮干。加1.0mL AFM1
樣品稀釋液和1.0mL 石油醚，振蕩混勻，4000r/min 下離心
5min，取下層清液即為待測樣液。
注意：若樣品中AFM1 偏高，建議將樣品提取液再進步稀
釋后檢測。
江蘇省蘇微微生物研究有限公司2018 版
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【檢測步驟】
、測定須知：
1. 使用之將所有試劑和所需板條回溫（20~25℃）。
2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。
3. ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的致
性，正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點。
4. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋
住微孔板。
二、操作步驟：
1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min
以上，液體試劑使用均須搖勻。
2. 取出所需數量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中，
放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。
3. 配置好的洗滌工作液在使用也需回溫。
4. 將樣本和標準品對應微孔編號，建議每個樣本和標準品
做2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5. 每孔加入250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置40s
左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干。
6. 分別加入標準溶液/待測樣液50μL 到對應的微孔中，加
入酶標物50μL/孔，后再加入抗試劑50μL/孔，輕輕震
蕩混勻，遮蓋后37℃恒溫培養(yǎng)箱中30min。
7. 小心揭開蓋板，甩掉反應液，加入洗滌液250μL/孔充分
洗滌5 次，每次間隔40s，用吸水紙拍干。
8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL，輕輕震蕩混勻，
遮蓋后37℃恒溫培養(yǎng)箱中顯色15min。
9. 加入終止液50μL/孔，輕輕震蕩混勻，設酶標儀于450nm
處讀取每孔OD 值。
(若無酶標儀，則不加終止用目測法可進行判定)。
【結果判定】
標準曲線的繪制與計算
用酶標儀測得每孔的光密度值(A)，繪制標準曲線。通過
準曲線，可準確定量樣品中AFM1 含量。
標準曲線：橫坐標為AFM1 標準濃度的對數，縱坐標為百
分比（即各標準品孔和樣品孔光密度值除以0ppb 標準品孔光
密度值(A0)再乘以100%所得，光密度值(標準孔或樣品孔) ／
光密度值(A0)×100%=％(縱坐標)）。相應每個樣品的AFM1 濃
度可從曲線上獲得。歡迎來電索取門的數據處理軟件進行
計算。
備注：試劑盒初篩后，若出現陽性結果，建議用仲裁法進步
確證。
【注意事項】
1. 試劑及樣本沒有恢復到室溫（20~25℃）會導致所有標準
的OD 值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準
曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應
立即進行下步操作。
3. 每種試劑使用均需搖勻。
4. 反應終止液為2M 硫酸，避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過了有
效期的試劑盒；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件：試劑盒保存于2~8℃，不能冷凍，將不用的
微孔板重新真空密封。標準物質和無色的顯色劑對光敏
感，因此要避光保存。
7. 試劑變質的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質，
應當棄之。0 標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5
（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8. 對玻璃器皿和AFM1 溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，
v/v）溶液浸泡過夜。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產品有效期為6 個月。生產日期見包裝盒。
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