描述：血漿總膽固醇包括2/3的膽固醇酯和1/3的游離膽固醇，是血脂的重要組分，二者與心腦血管疾病以及多種病理狀態(tài)密切相關(guān)。本試劑盒采用世界衛(wèi)生組織(WHO)、美國FDA、中國《全國臨床檢驗操作規(guī)程》推薦的總膽固醇和游離膽固醇檢測方法，靈敏度高，檢測范圍20~5000 µmol/L�？煽啃院椭貜�(fù)性俱佳。

原理：本試劑盒測定方法采用CHOD-PAP終點方法結(jié)合經(jīng)典GPO Trinder酶學(xué)反應(yīng)^【¹^】^,其原理為：(1) 膽固醇酯酶分解膽固醇酯為游離膽固醇。(2) 膽固醇氧化酶將游離膽固醇氧化，產(chǎn)生過氧化氫。(3) 在過氧化物酶催化下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，光密度值與膽固醇濃度成正比。

測定樣本范圍：血清、培養(yǎng)基

組成：(1) R1試劑 40 ml (2) R2試劑 10 ml (3) 5 mmol/L膽固醇標準品 0.5 ml

儲存條件：4ºC，三個月

所需設(shè)備：721、722型可見光分光光度計、酶標儀、生化分析儀。*佳工作波長550-555nm，如儀器無此波長建議優(yōu)先選用570 nm，次選530、490nm。常規(guī)比色杯即可。

操作步驟：

一、工作溶液配制: 按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合即可，立即使用或4ºC保存<1天，變色棄去。

二、樣本處理：

培養(yǎng)基：取無酚紅無血清細胞培養(yǎng)液，4ºC，10,000g離心5 min，取上清測定。新鮮培養(yǎng)基4ºC存放不宜超過1小時，若暫時無法測定可70ºC加熱10 min后凍存，測定前離心。

血液：新鮮血液4ºC， 2000 g離心5 min得到血漿，非抗凝血4ºC放置2小時得到血清。可4ºC 存放數(shù)天或−20 ºC半年。如超過線性范圍用生理鹽水1:1~1:5稀釋后測定。

三、標準品稀釋：

5 mM膽固醇標準品用無水乙醇倍比稀釋為2500、1250、625、312.5、156、78、39 µmol/L。通常稀釋4個點/管即可，注意設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。立即使用。

四、游離膽固醇測定：

1. 取180 µl測定工作溶液。

2. 在各工作液中，分別加入20 µl (10~20µl) 空白對照溶液（無水乙醇或蒸餾水均可）、標準品、待測樣品，反應(yīng)總體積200 µl。

3. 37ºC 反應(yīng)20min (15~30min)。也可25ºC室溫反應(yīng)30 min但靈敏度會略微降低。反應(yīng)平衡后顏色在60 min內(nèi)穩(wěn)定。

4. 測定時，先用蒸餾水或無水乙醇空白對照管調(diào)零，然后測定各管OD值。

5. 繪制標準曲線并計算游離膽固醇濃度。

Excel繪制標準曲線步驟：各標準管OD值為y軸，標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向?qū)�，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R²值-。

血清和培養(yǎng)基中游離膽固醇測定試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

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