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實(shí)驗(yàn)室代測(cè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

ATP 含量測(cè)試盒的測(cè)定原理

點(diǎn)擊次數(shù)：617 發(fā)布時(shí)間：2023/11/22 10:05:45

ATP 含量測(cè)試盒的測(cè)定原理

（100 管/48 樣）

一、檢測(cè)意義：

三磷酸腺苷（adenosine 5＇-triphosphate，ATP）是生物體內(nèi)能量轉(zhuǎn)換*基本的載體, 其含量的變化直接關(guān)系到各器官的能量代謝。ATP 作為*重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過(guò)程中起著重要作用。ATP 水平的改變，會(huì)影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下，ATP 水平會(huì)下降，而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ATP 水平。通常ATP 水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細(xì)胞凋亡時(shí) ATP 水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生狀態(tài)。ATP 含量測(cè)定試劑盒可以用于檢測(cè)紅細(xì)胞或組織內(nèi)的 ATP 水平。

二、測(cè)定原理：

肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸，生成磷酸肌酸，用磷鉬酸比色法進(jìn)行檢測(cè)。

三、試劑組成及配制：（100 管/48 樣）（本試劑盒附送雙蒸水一瓶，供客戶配試劑時(shí)使用）

[注]：本試劑盒中 ATP3# 粉劑-20℃冷凍保存，其余試劑 4℃保存，有效期 3 個(gè)月，開封后有效期為 1 個(gè)月。

四、樣本前處理：

1、紅細(xì)胞：抗凝全血取下層壓積紅細(xì)胞，一般按 1：4 的體積比加雙蒸水進(jìn)行稀釋，再混勻使溶血，制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10 分鐘，取上清液待測(cè)。

2、組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重，按重量（g）：體積（ml）=1：9 的比例，加入 9 倍體積的冷雙蒸水，冰水浴勻漿, 制成 10%的勻漿液(取出部分 3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘,取上清測(cè)定蛋白濃度)，再置于沸水浴中煮 10 分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘，取上清液待

測(cè)。

3、培養(yǎng)細(xì)胞：先離心處理將細(xì)胞與培養(yǎng)上清分離，除去培養(yǎng)上清，得到下層沉淀細(xì)胞（一般細(xì)胞數(shù)量達(dá)到 106），將收集好的細(xì)胞加入 300～500μL 冷雙蒸水，置于冰水浴中勻漿破碎(取出部分測(cè)定蛋白濃度)，后將細(xì)胞懸液于沸水浴中加熱 10 分鐘，取出混勻抽提 1 分鐘，即可用于測(cè)定。[注]：混勻抽提 1 分鐘即為漩渦混勻 1 分鐘。

五、操作步驟：