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點(diǎn)擊次數(shù)：551 發(fā)布時間：2023/12/4 10:22:01
丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒的操作步驟
（貨號：A141-1-1 Pyruvate Decarboxylase Kit，PDC 分光光度法）
一、測定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶
（ADH）來進(jìn)一步催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；
NADH 在340nm有吸收峰，而NAD+沒有；通過測定340nm
光吸收下降速率，來計算PDC 活性。
二、測定意義：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶，催
化丙酮酸脫羧生成乙醛。
三、自備儀器或用品：
研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計、1mL石英比
色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
四、試劑盒組成(50T/48 樣)：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1 瓶，﹣20℃保存。
試劑五：液體×1 瓶，﹣20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，小心把試劑四和五轉(zhuǎn)移到試劑三中，
充分溶解。
試劑六：液體×1 瓶，4℃保存。
五、粗酶液提取:
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后
棄上清；按照每200 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取
液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，
間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上
清，置冰上待測。
2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）:提取液體積(mL)為1：5～
10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）
進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置
冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測
六、操作步驟:
注：ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/mol/cm；
d：比色皿光徑，1cm；
V 總：反應(yīng)體系總體積，1mL=0.001 L；
V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL；
Cpr：蛋白濃度，mg/mL（需要另外測定，建議使用本
公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒）；
W：樣本質(zhì)量，g；
V 樣總：加入提取液體，1mL；
細(xì)胞數(shù)：細(xì)胞總數(shù)量，10 4個；
T：反應(yīng)時間，1 min。
丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒的操作步驟
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