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點(diǎn)擊次數(shù)：552 發(fā)布時(shí)間：2023/12/18 9:40:38
5’-核酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍(lán)微板法)的操作步驟
產(chǎn)品簡介:
5’-核昔酸酶(5＇-NT 或 NTP)廣泛分布于肝臟、膽道及其他各種組織中，該酶活性變化
常與 ALP 活性相平行。但在骨骼系統(tǒng)的疾病中，如腫瘤骨轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲亢、佝僂
病等，ALP 活力增高，但是 5-NT 活力正常，所以對于 ALP 活力提高的情況，測定 5-NT
活力有助于判斷 ALP 活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病。
Leagene 5’-核首酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍(lán)微板法)的檢測原理為 5-核首酸酶能催
化 5’-磷酸腺昔(AMP)水解，生成腺昔和磷酸，后者與酸反應(yīng)生成藍(lán)，可用比色法測
定無機(jī)磷的含量，計(jì)算 5-NT 活性，利用離子能選擇性的抑制 5-NT 的特性，在測定管
不加人抑制劑鎳離子，測出的活性為 ALP 和 5-NT 總活性，在對照管加入離子，可以測
出 ALP 的活性，測定管的酶活性減去對照管的酶活性即獲得 5-NT 活性，通過酶標(biāo)儀檢測
680nm 處吸光度。5-核昔酸酶的檢測對于研究自由基代謝平衡，抗衰老和腫瘤發(fā)病機(jī)制具
有一定的價(jià)值。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途
自備材料:
1、蒸餾水、生理鹽水
2、離心管或 EP 管
3、離心機(jī)、水浴鍋
4、96 孔板、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考) :
1、準(zhǔn)備樣品
① 血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-20°C凍存，用于 5-NT 的檢測
② 細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行裂解，可以采用 RAPI裂解液，如果有必要
需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，低速離心取上清，-20°C凍存，用于 5-NT 的檢測。
③ 高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的 5-NT，可以使用 AMP 酸性緩沖液稀釋
④ (選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 5＇-NT 含量
2、配制對照 NT Assay 工作液 :取適量的 NT Assay Buffer I、II、III,按I : II:III=13 :1:2的比例混合，即為對照 NT Assay 工作液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
3、配制測定 NT Assay 工作液 :取適量的 NT Assay Buffer I、II，按I:II=15 :1的比例混合，即為測定 NT Assay 工作液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
4、配制磷標(biāo)準(zhǔn)工作液:取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(6mmol/L)，按磷標(biāo)準(zhǔn)6mmol/L): AMP 酸性緩沖液=1:99 的比例混合，即為磷標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.06mmol/L)，4℃保存1個(gè)月。
5、配制定磷工作液:按定磷酸性液:定磷還原液:鉬酸胺溶液=6:1:1 混勻，即為定磷工作液工作液，4℃保存。
6、NT 測定:混勻，靜置 5min，蒸餾水調(diào)零，酶標(biāo)儀測定 680nm 處吸光度(分別記為 A空
白、A標(biāo)準(zhǔn)、A對照、 A 測定)。
注意事項(xiàng)
1、 本試劑盒亦可用分光光度計(jì)進(jìn)行檢測，但檢測的樣品數(shù)相應(yīng)減少，如果有條件盡量采
用分光光度計(jì)檢測，使其結(jié)果更為準(zhǔn)確
2、待測樣品中不能含有 5-NT 抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融
3、用血漿測定有可能引起渾濁。
4、溶血有輕度影響，脂血癥不會(huì)引起酶活性改變，但可能影響吸光度。
5、與金屬鰲合的抗凝劑會(huì)干擾金屬離子的激活作用，因此不宜采用金屬鰲合抗凝劑
6、離心管或試管必須清潔，否則污染顯色反應(yīng)
有效期:6個(gè)月有效;4℃運(yùn)輸，4℃保存
5’-核酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍(lán)微板法)的操作步驟
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