肝素親和填料使用方法

點擊次數(shù)：615 發(fā)布時間：2024/6/27 9:46:21

肝素親和填料使用方法

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素親和填料，是經(jīng)典的瓊脂糖凝膠層析介質(zhì)基球 NUPharose上鍵合肝素而成。 FF為 Fast Flow的縮寫，具備快流速的特點，可用于快速純化蛋白質(zhì)，適用性廣，易于放大。 HP為 High Performance的縮寫，具備分辨率高的特點。肝素親和的原理較為復(fù)雜，一般認(rèn)為肝素與蛋白的結(jié)合是離子相互作用、氫鍵與范德華力等多種驅(qū)動力共同作用的結(jié)果。肝素填料主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干擾素等的分離純化。也有文獻(xiàn)報道將肝素填料用于外泌體的純化。產(chǎn)品留了瓊脂糖極好的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點，適用于各種肝素親和層析。

使用方法參考

1、色譜柱裝填

以下闡述與層析系統(tǒng)連接時，填料的色譜柱裝填方法。

1 所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。

2）填料用量計算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積 =柱體積× 壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全讀取的穩(wěn)定體積。 Heparin NUPharose FF的壓縮比為 ~1.15 Heparin NUPharose HP的壓縮比為 ~1.20。為使達(dá)到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。

3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應(yīng)體積，抽去液體，并用約 3倍填料體積的純化水洗滌，重復(fù) 3次，以除去保存液。

4）裝柱填料懸液準(zhǔn)備：將填料轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦�，加�?適量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液原包裝中填料體積分?jǐn)?shù) 為使用前攪勻。

5 裝填前準(zhǔn)備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

6 裝填將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時使用裝柱器）為避免引入氣泡，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。

7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或 50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過 0.3 MPa 繼續(xù) 壓柱至界面清晰穩(wěn)定，標(biāo)記界面穩(wěn)定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門 /堵頭，關(guān)閉柱底的閥門 /堵頭，下壓柱頭至標(biāo)記位置下方與壓縮比對應(yīng)的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內(nèi)的填料。