上海信帆生物告訴大家：如何選購親和力更高的抗體

點擊次數(shù)：917 發(fā)布時間：2014/2/15 16:40:10

上海信帆生物告訴大家，如何選擇和篩選親和力更高的抗體！

在基于結(jié)合動力學(xué)，也被稱為解離速率（κoff）]的選擇中，在將遠(yuǎn)遠(yuǎn)過量的非標(biāo)記抗原加入到混合液中并維持一段特定時間之前，將首先選用飽和量的標(biāo)記抗原使其與噬菌體群結(jié)果。通過確定與末標(biāo)記抗原競爭的持續(xù)的時間，將允許大多數(shù)結(jié)合的野生型抗體解離，而優(yōu)化的突變體卻仍然結(jié)合著，這個方法對于具有較慢解離速率的突變體的選擇是很有效的。因為V基因無論在體內(nèi)或體外發(fā)生突變時，κoff下降都是一個產(chǎn)生高親和力的主要動力學(xué)機(jī)制。一般而言，此法可以選擇到（Kd）更佳的scFv。

我們通常傾向于平衡選擇法。在這個方法中，噬菌體與濃度低于平衡結(jié)合常數(shù)的抗原一同被孵育。它可以有效地選擇到改善平衡常數(shù)的抗體�？乖瓭舛认陆狄灿兄诖_保選擇到高親和力scFv，而不是那些在噬菌體中表達(dá)較佳或?qū)Υ竽c桿菌毒性較低的抗體。使用可溶性抗原就能設(shè)置超過平衡選擇方法所需抗原濃度的對照。噬菌體可以先結(jié)合生物素化抗原，而后用鏈霉親和素化磁珠進(jìn)行回收。可以預(yù)先估計選擇所用的適宜抗原濃度，但我們傾向于在輪中采用幾個不同的抗原濃度。后續(xù)幾輪選擇的抗原濃度可以根據(jù)測定結(jié)合性噬菌體在產(chǎn)出的多克隆噬菌體中結(jié)合性噬菌體的比例來決定。用Biacore進(jìn)行表面等離子共振技術(shù)（SPR）測定是*為準(zhǔn)確的。結(jié)合濃度測定是在物質(zhì)運(yùn)輸受限條件下進(jìn)行的。另外．也可用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定結(jié)合性克隆的比例。分析這些數(shù)據(jù)就可以在下一輪選擇前確定出*佳抗原濃度。我們在每一輪選擇后，一般會把抗原濃度降低10～100倍。在3～5輪選擇后，就可以篩選親和力得到優(yōu)化的克隆了。

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