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人白三烯B4(LTB4) ELISA Kit
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1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 |
8 nmol/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
4 nmol/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2 nmol/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1 nmol/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
0.5 nmol/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、 |
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl, |
然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品*終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡 |
量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 |
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 |
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用 |
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。 |
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 |
7. 溫育:操作同3。 |
8. 洗滌:操作同5。 |
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 |
10 分鐘. |
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 |
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 |
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【注意事項(xiàng)】 |
1.包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時(shí),應(yīng)平衡至室溫后,方可開(kāi)封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時(shí)放回有干燥劑的自封袋中,4℃密封保存。 |
2.滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻,首滴棄去;滴加試劑時(shí)瓶身應(yīng)保持豎直。 |
3.瓶蓋每次使用后要蓋緊,各瓶蓋之間不可混用。不同批號(hào)試劑盒的試劑組份不可混用。 |
4.孵育時(shí),推薦使用水浴箱。如無(wú)水浴箱,可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。 |
5.用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性,須小心使用。 |
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