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本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn),不得用于醫(yī)療或食用。 高爾基染色(掃描)
Golgi-Cox浸染法是研究神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞正常和非正常形態(tài)*有效的方法。使用Golgi技術(shù),在藥物處理過(guò)的動(dòng)物腦中和因神經(jīng)疾病死亡的病人腦中發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)樹(shù)突和樹(shù)突微小的形態(tài)改變。
神經(jīng)元細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)樹(shù)突棘呈黑色,背景淡黑色或無(wú)色
送樣運(yùn)輸要求:
樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運(yùn)輸送樣。
切勿固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng),切勿冷凍結(jié)冰。
基于神經(jīng)元的嗜銀特性,高爾基染色可將神經(jīng)元的軸突或樹(shù)狀突起染成黑色后,使樹(shù)突棘可視化,是研究神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)*有效的方法,另一方面,樹(shù)突范圍小、突觸棘短而少,意味著發(fā)育差,神經(jīng)傳遞慢。
高爾基染色通過(guò)使用重鉻酸鉀和鉻酸鉀,氯化汞作為初步固定劑浸潤(rùn)組織,鉻鹽和神經(jīng)細(xì)胞中的蛋白質(zhì)結(jié)合,氯化汞通過(guò)白色沉淀來(lái)標(biāo)記單個(gè)細(xì)胞,進(jìn)一步經(jīng)過(guò)堿處理,使沉淀物變黑(硫化汞)。
主要實(shí)驗(yàn)步驟:
1.提前一天等量混合溶液A和B,取上清液進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);
2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行深度麻醉,并盡快地從顱骨中取出動(dòng)物的腦(不能灌注,灌注會(huì)造成陰性結(jié)果),放入A和B混合液,避光,室溫14天;
3. 14天后,把組織小心移入溶液C,室溫黑暗至少72小時(shí)(可長(zhǎng)達(dá)1周)。24小時(shí)后或次日至少更換一次溶液;
4. 組織用紙沾干,稍裹一些OCT,在用干冰降溫的-70度異戊烷里凍硬,鋁紙包好,負(fù)80度存放;
5. 用OCT 或水包埋組織,并切片(厚度80-200um);
6. 染色:(整個(gè)過(guò)程中和蓋蓋玻片之前的任何一步都不要讓切片變干)用雙蒸水沖洗切片兩次,每次4min;把切片置于由1份溶液D,1份溶液E和2份的雙蒸水組成的混合液中10min(堿化,工作液現(xiàn)配現(xiàn)用);蒸餾水沖洗切片兩次,每次4min(蒸餾水應(yīng)頻繁更換新的);50%,75%和95%的乙醇中對(duì)切片進(jìn)行脫水,每個(gè)濃度梯度脫水4min然后在無(wú)水乙醇中對(duì)切片進(jìn)行脫水,4次,每次4min(不要延長(zhǎng)時(shí)間);在二甲苯中透明3次,每次4min,*后用樹(shù)脂封片劑對(duì)蓋玻片進(jìn)行封片。
數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)主要分析在樹(shù)突復(fù)雜性(dendritic complexity),包括樹(shù)突分支數(shù)(number of dendritic branch)、樹(shù)突長(zhǎng)度(dendritic length)、樹(shù)突棘密度(dendritic spine density)等。其中,Sholl 分析(以胞體為圓心,不包括胞體同心圓,計(jì)算交點(diǎn)個(gè)數(shù))是常用的分析方法。
更新時(shí)間:2024/11/26 14:31:28
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