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鍍銀染色實(shí)驗(yàn)簡介:
鍍銀染色改良bielschowsky法。鍍銀染色主要染神經(jīng)軸突,神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)原纖維,神經(jīng)原纖維纏結(jié),老年斑呈黑色,背景金黃色。常用于研究老年性癡呆等神經(jīng)細(xì)胞原纖維的病理改變,了解神經(jīng)纖維有無變性,破壞的程度。
鍍銀染色實(shí)驗(yàn)步驟(僅供參考):
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。
2、 硝酸銀反應(yīng):切片浸入20%硝酸銀加蓋于暗處反應(yīng)20min。
3、 蒸餾水洗(在此期間配制銀氨溶液):染色第2步用過的20%硝酸銀,逐滴加入氫氧化銨,邊滴邊攪拌,直到開始形成的白色沉淀又消失,銀液變清即為銀氨溶液。
4、 銀氨液處理:切片浸入銀氨液作用15min(在此期間配制稀氨水,銀氨液用于下步配制顯影工作液)。稀氨水配制:蒸餾水30ml加氫氧化銨3滴。
5、 稀氨水中浸泡:切片移入稀氨水中浸泡(在此期間配制顯影工作液)。
顯影儲(chǔ)備液:甲醛液20ml+蒸餾水100ml+硝酸1滴+檸檬酸0.5g。
顯影工作液:取第4步用過的銀氨液30ml,加入顯影儲(chǔ)備液3滴,混合均勻,即配即用不能保存。
6、 顯色:切片浸入顯影工作液中顯色,約3-7min,鏡下控制顯色,金黃色的背景,神經(jīng)纖維呈黑色時(shí)即取出。切片浸入第5步用過的稀氨水中浸泡1min。流水沖洗1min。
7、 去除未反應(yīng)的銀離子:5%硫代硫酸鈉處理2min(固定已反應(yīng)的銀鹽和除去未反應(yīng)的銀離子)。流水沖洗5min。
8、 脫水封片:將切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-無水乙醇Ⅰ5min -無水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片。
9、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
染色結(jié)果:神經(jīng)軸突,神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)原纖維,神經(jīng)原纖維纏結(jié),老年斑及樹突呈黑色,背景金黃色。
更新時(shí)間:2024/11/26 14:31:40
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