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價(jià)格：電議 型號(hào)：
原產(chǎn)地：中國(guó)大陸發(fā)布時(shí)間：2024/11/15 15:19:08
采購(gòu)度：157
免疫熒光單標(biāo)雙色（雙寬玻片）
服務(wù)介紹：
免疫熒光單標(biāo)標(biāo)記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在一張切片上的一個(gè)抗原進(jìn)行熒光標(biāo)記，從而實(shí)現(xiàn)定位，定性，半定量的分析。
| 名稱 | 規(guī)格 |
| 免疫熒光單標(biāo)雙色（雙寬玻片） | 張 |
實(shí)驗(yàn)流程：
1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-無(wú)水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。
2. 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火8min�；�8min轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定）
3. 畫圈：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走）
4. 血清封閉:在圈內(nèi)滴加BSA孵育30min。（一抗若是山羊來源，則加驢血清）
5. 加抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）
6. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬標(biāo)記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
7. DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
8. 自發(fā)熒光淬滅：切片稍甩干后，在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min，流水沖洗10min。
9. 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
10. 鏡檢拍照：切片置于掃描儀下采集圖像或熒光顯微鏡下拍照。（DAPI紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm，發(fā)藍(lán)光；FITC激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm，發(fā)紅光. CY5激發(fā)波長(zhǎng) 608-648nm, 發(fā)射波長(zhǎng)672-712。 DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽(yáng)性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光，綠光 。
送樣運(yùn)輸要求：
1.冰凍切片-20℃保存和運(yùn)輸
2.石蠟切片常溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室。
3.細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無(wú)菌PBS洗滌后用無(wú)菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。
更新時(shí)間：2024/11/26 14:32:05
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