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本產(chǎn)品僅供科研實驗,不得用于醫(yī)療或食用。
【產(chǎn)品名稱】 | 人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒 | |||||||||
【產(chǎn)品英文名稱】 | Human Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA kit | |||||||||
【保存溫度】 | 2-8℃,避光保存 | |||||||||
【產(chǎn)品規(guī)格】 | 96T/48T | |||||||||
【有效期】 | 6個月 | |||||||||
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒 | ||||||||||
操作流程 | ||||||||||
1. 加入10 μL 校準品、質(zhì)控品、待測樣品到反應(yīng)板孔內(nèi); | ||||||||||
2. 加入100 μL酶標抗體工作液到反應(yīng)板孔內(nèi); | ||||||||||
3. 室溫搖床溫育120 min; | ||||||||||
4. 洗板6次; | ||||||||||
5. 加入1X底物工作液100 μL; | ||||||||||
6. 室溫溫育15 min; | ||||||||||
7. 加入100 μL終止液,搖勻約5 s; | ||||||||||
8. 用波長325 nm/420 nm的激發(fā)/發(fā)射光檢測 | ||||||||||
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒 | ||||||||||
注意事項如下: | ||||||||||
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準確性。 | ||||||||||
有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 | ||||||||||
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括: | ||||||||||
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。 | ||||||||||
其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選: | ||||||||||
用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 | ||||||||||
(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。 | ||||||||||
吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等) | ||||||||||
進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。 | ||||||||||
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。 | ||||||||||
然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。 | ||||||||||
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。 | ||||||||||
有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。 | ||||||||||
通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 具體事項請來電咨詢。 | ||||||||||
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒 | ||||||||||
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更新時間:2024/11/26 14:28:39
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