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標(biāo)簽：人瘦素 LEP ELISA KIT elisa試劑盒

詳細(xì)內(nèi)容

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)，不得用于醫(yī)療或食用。

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【產(chǎn)品中文名稱】	人瘦素（LEP）ELISA 試劑盒
【產(chǎn)品英文名稱】	Human Leptin,LEP ELISA kit
【保存溫度】	2-8℃，避光保存
【產(chǎn)品規(guī)格】	96T/48T
【有效期】	6個(gè)月
人瘦素（LEP）ELISA 試劑盒
操作流程
1. 加入10 μL 校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、待測(cè)樣品到反應(yīng)板孔內(nèi)；
2. 加入100 μL酶標(biāo)抗體工作液到反應(yīng)板孔內(nèi)；
3. 室溫?fù)u床溫育120 min；
4. 洗板6次；
5. 加入1X底物工作液100 μL；
6. 室溫溫育15 min；
7. 加入100 μL終止液，搖勻約5 s；
8. 用波長(zhǎng)325 nm/420 nm的激發(fā)/發(fā)射光檢測(cè)
人瘦素（LEP）ELISA 試劑盒

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ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1.　正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2.　在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：
用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。
吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：
即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。
選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml。
（3）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。
然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）
在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。
有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，
應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入.
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更新時(shí)間：2024/11/26 14:28:39

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