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本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn),不得用于醫(yī)療或食用。
【產(chǎn)品中文名稱】 | 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA 試劑盒 | ||||||||
【產(chǎn)品英文名稱】 | Human Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA kit | ||||||||
【保存溫度】 | 2-8℃,避光保存 | ||||||||
【產(chǎn)品規(guī)格】 | 96T/48T | ||||||||
【有效期】 | 6個(gè)月 | ||||||||
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA 試劑盒 | |||||||||
操作流程 | |||||||||
1. 加入10 μL 校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、待測(cè)樣品到反應(yīng)板孔內(nèi); | |||||||||
2. 加入100 μL酶標(biāo)抗體工作液到反應(yīng)板孔內(nèi); | |||||||||
3. 室溫?fù)u床溫育120 min; | |||||||||
4. 洗板6次; | |||||||||
5. 加入1X底物工作液100 μL; | |||||||||
6. 室溫溫育15 min; | |||||||||
7. 加入100 μL終止液,搖勻約5 s; | |||||||||
8. 用波長(zhǎng)325 nm/420 nm的激發(fā)/發(fā)射光檢測(cè) | |||||||||
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA 試劑盒 | |||||||||
ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下: | |||||||||
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 | |||||||||
有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 | |||||||||
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括: | |||||||||
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。 | |||||||||
其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選: | |||||||||
用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 | |||||||||
(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。 | |||||||||
吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定: | |||||||||
即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。 | |||||||||
選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。 | |||||||||
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。 | |||||||||
然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度) | |||||||||
在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 | |||||||||
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。 | |||||||||
有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后, | |||||||||
應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入. | |||||||||
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更新時(shí)間:2024/12/11 17:18:12
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