產(chǎn)品名稱：	豚鼠血清一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒
產(chǎn)品英文名稱：	guinea pig nitric oxide,NO ELISA kit
規(guī)格：	48T/96T
檢測方法：	雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）
標(biāo)本：	血清，血漿，細(xì)胞上清液，組織等
種屬：	Porcine/豬
試劑盒說明書：	請(qǐng)來電或者郵件索取

豚鼠血清一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒
實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘，微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液備用。樣品收集、處理及保存
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集上清液，以1000×g離心15
分鐘，收集上清。
2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞 3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到10^4-10^6/ml左右，通過反復(fù)凍融，
使細(xì)胞破壞，并放出細(xì)胞內(nèi)成份�；蛘呒�(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置 10 -20 分鐘后，
以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以 1000×g
離心、15 分鐘，收集上清。
6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，超聲破碎儀，
將標(biāo)本勻漿，以2000 -300rmp離心 20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。
7. 樣品中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-80 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)
沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心
或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度
加熱解或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。
豚鼠血清一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒
操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù)
冷藏處理，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入100ul的
蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時(shí)。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。
8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應(yīng)10 -15分鐘，加入 50 ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm波長讀取各孔的O 值。注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，
讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。
豚鼠血清一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒
數(shù)據(jù)計(jì)算
1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即堅(jiān)強(qiáng)空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）
1.2計(jì)算器或手工作圖處理：Logit-log 計(jì)算：以6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品OD 值的 Logit為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的
濃度的 log值為橫坐標(biāo)X，繪制曲線圖。logit值計(jì)算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工
作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)，在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為
橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的 B/B0B為縱坐標(biāo)在 logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直）。
2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的
數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是后濃度值。
3.敏感度：1.0µmol/L
豚鼠血清一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒
上海信帆生物年中回饋，所有產(chǎn)品一律出售，另還有好禮相送，歡迎來電咨詢！本公司提供的、
elisa試劑盒均正品質(zhì)量保證，全程提供技術(shù)服務(wù)，提供免費(fèi)代測服務(wù)，有質(zhì)量問題，免費(fèi)包退換！
上海信帆實(shí)驗(yàn)室代測項(xiàng)目：放免代測，免疫組化代測，熒光定量PCR代測，病理細(xì)胞染色代測，
WB實(shí)驗(yàn)，蛋白表達(dá)與純化，ELISA酶聯(lián)免疫代測等

實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：

1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘，微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液備用。樣品收集、處理及保存

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集上清液，以1000×g離心15

分鐘，收集上清。

2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞 3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到10^4-10^6/ml左右，通過反復(fù)凍融，

使細(xì)胞破壞，并放出細(xì)胞內(nèi)成份�；蛘呒�(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置 10 -20 分鐘后，

以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以 1000×g

離心、15 分鐘，收集上清。

6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，超聲破碎儀，

將標(biāo)本勻漿，以2000 -300rmp離心 20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。

7. 樣品中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-80 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)

沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心

或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度

加熱解或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。

豚鼠血清一氧化氮（NO）ELISA 試劑盒

操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù)

冷藏處理，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入100ul的

蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時(shí)。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙徹底拍干。

7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。

8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應(yīng)10 -15分鐘，加入 50 ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm波長讀取各孔的O 值。注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，

讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

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數(shù)據(jù)計(jì)算

1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即堅(jiān)強(qiáng)空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）

1.2計(jì)算器或手工作圖處理：Logit-log 計(jì)算：以6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品OD 值的 Logit為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的

濃度的 log值為橫坐標(biāo)X，繪制曲線圖。logit值計(jì)算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工

作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)，在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為

橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的 B/B0B為縱坐標(biāo)在 logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直）。

2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的

數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是后濃度值。

3.敏感度：1.0µmol/L

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更新時(shí)間：2024/11/26 14:29:03

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