產(chǎn)品名稱：	大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體（AT-Ⅲ）ELISA 試劑盒
產(chǎn)品英文名稱：	Rat Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA kit
規(guī)格：	48T/96T
檢測方法：	雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）
標本：	血清，血漿，細胞上清液，組織等
種屬：	Rat\\鼠
試劑盒說明書：	請來電或者郵件索取

大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體（AT-Ⅲ）ELISA 試劑盒
實驗材料與試劑配制：
1. 儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘，微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液備用。樣品收集、處理及保存
1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集上清液，以1000×g離心15
分鐘，收集上清。
2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞 3次，調(diào)整細胞濃度達到10^4-10^6/ml左右，通過反復凍融，
使細胞破壞，并放出細胞內(nèi)成份。或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置 10 -20 分鐘后，
以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以 1000×g
離心、15 分鐘，收集上清。
6. 組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，超聲破碎儀，
將標本勻漿，以2000 -300rmp離心 20 分鐘，收集上清進行檢測。
7. 樣品中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。
8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-80 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)
沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心
或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度
加熱解或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體（AT-Ⅲ）ELISA 試劑盒
操作步驟：
1. 取出試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。
2. 分組：取出 96 孔板根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標準品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù)
冷藏處理，分別設(shè)標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。
注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設(shè)置復孔。
3. 加樣：依照標準品的順序分別加入100ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入100ul的
蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測樣本。
4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。
5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時。
6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙徹底拍干。
7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。
8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應10 -15分鐘，加入 50 ul 終止液。
9. 讀板：在 450nm波長讀取各孔的O 值。注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，
讀板時間控制在終止反應后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準確性。
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體（AT-Ⅲ）ELISA 試劑盒
數(shù)據(jù)計算
1. 繪制標準曲線：各標準品 OD 值減去底色即堅強空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標準曲線圖。
1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）
1.2計算器或手工作圖處理：Logit-log 計算：以6個標準品OD 值的 Logit為縱坐標 y，以標準品的
濃度的 log值為橫坐標X，繪制曲線圖。logit值計算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工
作圖：以標準濃度取log值為橫坐標，對應的logit值為縱坐標，在普通坐標紙上或以標準濃度為
橫坐標，對應的 B/B0B為縱坐標在 logit-log坐標紙上畫出標準曲線（理想化時是一條直）。
2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標紙，查出的
數(shù)值應取反對數(shù)才是后濃度值。
3.敏感度：1.0µmol/L
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體（AT-Ⅲ）ELISA 試劑盒
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上海信帆實驗室代測項目：放免代測，免疫組化代測，熒光定量PCR代測，病理細胞染色代測，
WB實驗，蛋白表達與純化，ELISA酶聯(lián)免疫代測等

實驗材料與試劑配制：

1. 儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘，微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。

2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液備用。樣品收集、處理及保存

1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集上清液，以1000×g離心15

分鐘，收集上清。

2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞 3次，調(diào)整細胞濃度達到10^4-10^6/ml左右，通過反復凍融，

使細胞破壞，并放出細胞內(nèi)成份。或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置 10 -20 分鐘后，

以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以 1000×g

離心、15 分鐘，收集上清。

6. 組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，超聲破碎儀，

將標本勻漿，以2000 -300rmp離心 20 分鐘，收集上清進行檢測。

7. 樣品中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-80 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)

沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心

或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度

加熱解或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。

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操作步驟：

1. 取出試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標準品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù)

冷藏處理，分別設(shè)標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設(shè)置復孔。

3. 加樣：依照標準品的順序分別加入100ul 的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入100ul的

蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測樣本。

4. 加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標溶液（空白對照孔除外）。

5. 溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙徹底拍干。

7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。

8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應10 -15分鐘，加入 50 ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm波長讀取各孔的O 值。注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，

讀板時間控制在終止反應后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準確性。

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數(shù)據(jù)計算

1. 繪制標準曲線：各標準品 OD 值減去底色即堅強空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標準曲線圖。

1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ）

1.2計算器或手工作圖處理：Logit-log 計算：以6個標準品OD 值的 Logit為縱坐標 y，以標準品的

濃度的 log值為橫坐標X，繪制曲線圖。logit值計算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工

作圖：以標準濃度取log值為橫坐標，對應的logit值為縱坐標，在普通坐標紙上或以標準濃度為

橫坐標，對應的 B/B0B為縱坐標在 logit-log坐標紙上畫出標準曲線（理想化時是一條直）。

2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標紙，查出的

數(shù)值應取反對數(shù)才是后濃度值。

3.敏感度：1.0µmol/L

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更新時間：2024/11/26 14:29:03

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