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價格：電議 型號：
原產(chǎn)地：中國大陸發(fā)布時間：2013/8/8 21:00:44
采購度：304
本產(chǎn)品僅供科研實驗，不得用于醫(yī)療或食用。
| 產(chǎn)品名稱： | 人泛素連接酶（E3/UBPL）ELISA 試劑盒 | |||||
| 產(chǎn)品英文名稱： | Human E3/ubiquitin-protein ligase,E3/UBPL ELISA kit | |||||
| 規(guī)格： | 48T/96T | |||||
| 檢測方法： | 雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA） | |||||
| 標(biāo)本： | 血清，血漿，細胞上清液，組織等 | |||||
| 種屬： | Human\\人 | |||||
| 試劑盒說明書： | 請來電或者郵件索取 | |||||
| 人泛素連接酶（E3/UBPL）ELISA 試劑盒 | ||||||
| 實驗材料與試劑配制： | ||||||
| 1. 儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘，微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。 | ||||||
| 2. 洗液的配制：按 1:100的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存 | ||||||
| 1. 細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集上清液，以1000×g離心15 | ||||||
| 分鐘，收集上清。 | ||||||
| 2. 細胞：用PBS反復(fù)洗滌細胞 3次，調(diào)整細胞濃度達到10^4-10^6/ml左右，通過反復(fù)凍融， | ||||||
| 使細胞破壞，并放出細胞內(nèi)成份�；蛘呒毎暦鬯椋x心取上清液檢測。 | ||||||
| 3. 血清： 在室溫 下， 血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。 | ||||||
| 4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置 10 -20 分鐘后， | ||||||
| 以1000×g離心15分鐘，收集上清。 | ||||||
| 5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集 ，以 1000×g | ||||||
| 離心、15 分鐘 ，收集上清。 | ||||||
| 6. 組織標(biāo)本：切取 組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，超聲破碎儀， | ||||||
| 將標(biāo)本勻漿，以2000 -300rmp離心 20 分鐘 ，收集上清進行檢測 。 | ||||||
| 7. 樣品 中不能含有 NaN3，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。 | ||||||
| 8. 保存 ：如果樣品不能立即檢測，應(yīng)將其分裝，-80 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn) | ||||||
| 沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心 | ||||||
| 或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解或更高的溫度 | ||||||
| 加熱解或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。 | ||||||
| 人泛素連接酶（E3/UBPL）ELISA 試劑盒 | ||||||
| 操作步驟 ： | ||||||
| 1. 取出 試劑盒，室溫（ 20 -25 ℃）放置 30 分鐘。 | ||||||
| 2. 分組： 取出 96 孔板 根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需板條，把剩余的板條繼續(xù) | ||||||
| 冷藏處理，分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個濃度）、空白 孔、待測樣品組。 | ||||||
| 注：為減少實驗誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。 | ||||||
| 3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入100ul的 | ||||||
| 蒸餾水；其余微孔中加入100ul的待測樣本。 | ||||||
| 4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標(biāo)溶液 （空白對照孔除外）。 | ||||||
| 5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時。 | ||||||
| 6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15 -30s 30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙徹底拍干。 | ||||||
| 7. 顯色：各孔加入顯色劑A液 50ul 后，再加入顯色劑 B液 50ul 。 | ||||||
| 8. 終止： 25 -37 ℃下避光反應(yīng)10 -15分鐘， 加入 50 ul 終止液。 | ||||||
| 9. 讀板：在 450nm波長讀取各孔的O 值。注： 讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡， | ||||||
| 讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30 分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。 | ||||||
| 人泛素連接酶（E3/UBPL）ELISA 試劑盒 | ||||||
| 數(shù)據(jù)計算 | ||||||
| 1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：各標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值減去底色即堅強空白孔OD 值（數(shù)據(jù)處理如下），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 | ||||||
| 1.1軟件處理：建議用戶使logit-log模式或四參數(shù)據(jù)處理模式（ y=（a-d）/（1+（x/c）^b）+d ） | ||||||
| 1.2計算器或手工作圖處理：Logit-log 計算：以6個標(biāo)準(zhǔn)品OD 值的 Logit為縱坐標(biāo) y，以標(biāo)準(zhǔn)品的 | ||||||
| 濃度的 log值為橫坐標(biāo)X，繪制曲線圖。logit值計算公式如下:logit=ln（B/ B0）（1－B/ B0）手工 | ||||||
| 作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)，在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為 | ||||||
| 橫坐標(biāo)，對應(yīng)的 B/B0B為縱坐標(biāo)在 logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時是一條直）。 | ||||||
| 2. 根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的 | ||||||
| 數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是*后濃度值。 | ||||||
| 3.敏感度：1.0µmol/L | ||||||
| 人泛素連接酶（E3/UBPL）ELISA 試劑盒 | ||||||
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更新時間：2024/11/26 14:29:15
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