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      兔硫酸肝素糖蛋白(HSPG) ELISA試劑盒廣東免費(fèi)代測

      兔硫酸肝素糖蛋白(HSPG) ELISA試劑盒廣東免費(fèi)代測

      價(jià)格:電議 型號(hào):

      原產(chǎn)地:中國大陸發(fā)布時(shí)間:2014/10/26 20:53:01

      上海信帆作為國內(nèi)ELISA試劑盒供應(yīng)商,我們多年以來一直為客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,良好的服務(wù),獲得廣大客戶的一直好評(píng)。我們所銷售的ELISA試劑盒,全程提供技術(shù)指導(dǎo),提供售后服務(wù),有質(zhì)量問題免費(fèi)包退換,免除您實(shí)驗(yàn)的后顧之憂。歡迎聯(lián)系。


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      標(biāo)簽:兔硫酸肝素糖蛋白   (HSPG)   ELISA試劑盒   

      詳細(xì)內(nèi)容

      本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn),不得用于醫(yī)療或食用。 

      兔硫酸肝素糖蛋白(HSPG) elisa試劑盒
      本試劑盒用于測定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中兔硫酸肝素糖蛋白(HSPG)的含量。
      ELISA技術(shù)原理:以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來
      1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
      2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
      3. 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
      4. 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記 的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
      5. 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
      6. 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量 與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水 平),并且重復(fù)性好。
       
      樣本處理及要求:
      1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
      2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
      3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
      4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
      5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
      6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
      7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
      操作步驟
      1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L,20ng/L ,10ng/L,5ng/L, 2.5ng/L)。
      2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
      3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
      4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
      5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
      6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
      7. 溫育:操作同3。
      8. 洗滌:操作同5。
      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
      10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
      11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
      注意事項(xiàng):
      1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
      2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
      3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
      4. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
      6. 底物請(qǐng)避光保存。
      7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
      8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
      9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
      10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
      兔硫酸肝素糖蛋白(HSPG) ELISA試劑盒

      更新時(shí)間:2024/11/26 14:30:52

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