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· 上 傳 者： 上海信帆生物科技有限公司
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· 資料簡介： 上海信帆 版權所有上海信帆生物科技有限公司ELISA 的樣本收集與前期準備利用ELISA 進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。(一) 臨床樣本的收集A、血液樣本有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無名指內側采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷病人，可選擇皮膚完整處采血。由于部分血液常規(guī)檢測（如白細胞計數、分類等）受生理因素影響波動過大，比較時宜使條件盡量一致。涉及到體內出、凝血功能的檢測項目（如血小板計數，出血時間或凝血時間等）的檢測，一定要注意了解患者是否用過抗凝、促凝藥物，以便在減少或避免干擾因素的影響。2．靜脈血除涉及各種止血和血栓檢測等項目需采用抗凝靜脈血血漿外，目前絕大多數檢測項目的分析檢測可直接采用靜脈血的血清。在血清檢測項目中，有些（如血糖，血脂等）受飲食及晝夜因素影響較大，一般以清晨空腹血標本為宜；有些在血中衰變較快（血清酶活性測定如ACP 活性等），0~4℃貯存活性減弱也不一，這些項目的檢測必須及時而快速；有些（如肌酸激酶等）受運動等因素影響較大。抽血時避免溶血的發(fā)生也十分重要，尤其涉及血鉀，LDH等的測定。B、尿液樣本同血標本一樣，尿液標本受飲食、運動、藥物量等因素的影響也較大，特別是飲食的影響，故一般來說晨尿優(yōu)于隨機尿。晨尿是指清晨起床后的次尿標本，較濃縮和酸化，有形成分（如血細胞，上皮細胞，管形）相對集中便于觀察。隨機尿即隨意一次尿，留取方便，但受飲食、運動、藥物影響較甚，易于出現假陽性和假陰性結果，如飲食性蛋白尿，飲食性糖尿，維生素C 干擾潛血結果等。餐后尿（午餐后2 小時收集的患者尿液）適用于尿糖，尿蛋白和尿膽原的檢查，此時的尿標本可增加試驗敏感性，檢出較輕微的病變。12 小時尿細胞計數即Addis 計數（前晚8 時排空膀胱后留取至次日晨8 時的所有尿液），因時間較長，細菌易繁殖，須加入防腐劑甲醛。24 小時尿（天晨8 時排空膀胱后留取至次日晨8 時的所有尿液）中化學物質的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羥類固醇，兒茶酚胺，Ca2+等，檢測不同的物質，選擇不同的防腐劑防腐。清潔中段尿多用于尿細菌培養(yǎng)，要求無菌，沖洗外陰后留取標本。所有尿標本的收集都應足量，*少12 ml，50 ml，定時尿須全部收集，對女性患者應避免陰道分泌物、經血污染尿標本。C、糞便樣本糞便標本的檢測對判斷消化系統(tǒng)疾病有重要參考價值。采集時要求用干凈的竹簽選取含有粘液、膿血等異常病變成分的糞便，對外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材。上海信帆 版權所有找寄生蟲蟲體及作蟲卵計數應收集24 小時糞便。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體應于排便后立即檢查，從有膿血和稀軟處取材，保溫送檢。查日本血吸蟲蟲卵時應取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時至少留取30g 糞便，且需盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚12 時或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。隱血試驗（化學法），試驗前3 日禁食肉類及含動物血食物并禁服鐵劑，維生素C 等。所有糞便標本采集后1 小時內應檢查完畢，以防止有形成分受消化酶及pH 的破壞,來不及檢測的，應及時用PBS 進行緩沖處理，離心去上清保存。D、腦脊液樣本腦脊液標本采集后立即送檢，放置過久將影響檢驗結果：如細胞變性，破壞，導致計數和分類不準；有些化學物質如葡萄糖等將分解含量減少；細菌發(fā)生自溶影響細菌的檢出率。腦脊液抽取后一般分裝三個無菌管，管作細菌培養(yǎng)，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查，三管的順序不宜顛倒。因標本采集較難，全部送檢和檢測過程應注意安全。E、胸腹水樣本與腦脊液標本一樣，采集后的標本注意安全，及時送檢。一般也分裝三管，一管作常規(guī)細胞學檢查，一管生化檢查，一管細菌培養(yǎng)，順序以與腦脊液相同為宜。F、前列腺液樣本前列腺液標本由前列腺按摩后采集，液量少時直接滴在載玻片上及時送檢，須注意防止標本蒸干，量多時收集在潔凈干燥的試管中。若按摩不出前列腺液，可檢查按摩后的尿液沉渣。G、精液樣本精液標本采集前應禁欲3~7 天，排凈尿液后可用手淫法或其他方法將精液直接排入干凈的容器中，保溫并及時送檢。由于精子生成日間變動較大，一般應檢查2~3 次（每次間隔1~2周）方可做診斷。H、陰道分泌物樣本陰道標本采集前24 小時應禁止房事、盆浴、陰道檢查、陰道灌洗及局部上藥等，取材所用器械需清潔。一般用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道穹后部、宮頸管口等處取材，制成生理鹽水涂片后觀察陰道分泌物標本，經期的女性患者不宜檢查陰道分泌物標本。(二) ELISA 的樣本實驗準備在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆�。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫?/div>
有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆�。標本應避免反復凍融�?/div>
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。上海信帆 版權所有2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。3. 尿液：用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。5. 培養(yǎng)細胞檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。6. 組織標本切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本�?/div>
化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。上海信帆生物科技有限公司 歡迎前來咨詢 www.papszx.net
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