實(shí)驗(yàn)室代測實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

上海信帆為大家提供:MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒操作說明書

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MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

MTT 比色法是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。
MTT 檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水丌溶性的藍(lán)紫色 Formazan
并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解。
然后通過酶標(biāo)儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大
，則吸光度越低。eMTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒采用了自主研發(fā) Formazan solvent，使檢測本底低，靈敏度高，線性范圍寬。
產(chǎn)品組成：
編號(hào)名稱CT0026500T Storage試劑(A): MTT solution(5mg/ml)5ml-20℃ 避光
試劑(B): Formazan solvent60mlRT
使用說明書1 份

自備材料：1、細(xì)胞培養(yǎng)液
2、胰蛋白酶消化液
3、低速離心機(jī)
4、 96 孔培養(yǎng)板
5、細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器
6、細(xì)胞培養(yǎng)箱
7、搖床
8、顯微鏡
9、酶聯(lián)免疫檢測儀

操作步驟(僅供參考)：
1、細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無需消化)。
2、低速離心，收集細(xì)胞沉淀。
3、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。
4、細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 個(gè)細(xì)胞/孔。通常細(xì)胞增殖實(shí) 驗(yàn)每孔加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。5、 37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。
6、按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予 0～20μl 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。
7、棄培養(yǎng)液，每孔加入 10μl MTT solution 和 100μl 新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù) 孵育 4h。
8、棄培養(yǎng)液，每孔加入 110μl Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì)長一些。
9、在酶聯(lián)免疫檢測儀 570nm 測定各孔吸光度。

注意事項(xiàng)：
1、 MTT solution 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。
2、由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，應(yīng)注意蒸發(fā)問題。
3、 MTT solution 在低溫情況下會(huì)凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。
4、 Formazan solvent 可以-20℃儲(chǔ)存，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶  解，并且必須在全部溶解并混勻后使用
5、觀察 formazan 是否完全溶解，亦可以借助光學(xué)顯微鏡觀察。
6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。
7、應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對(duì)照。
8、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個(gè)月有效。