實(shí)驗(yàn)室代測實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase, α-GC）試劑盒說明書下載

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α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase, α-GC）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化水解芳基或烴基與糖

基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān)，而且與細(xì)胞識別和一些

信號分子產(chǎn)生密切相關(guān)。

測定原理：

α-GC 分解對-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm 有吸收峰，通

過測定吸光值升高速率來計(jì)算α-GC 活性。

自備用品：

可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸

餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×2 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入10mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的

試劑仍-20℃保存。

試劑二：液體25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體50mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提�。�

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（104 個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提

取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；

15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，

加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

試劑名稱（μL）測定管對照管

試劑一 400

試劑二 500 500

樣本 100 100

充分混勻，放入37℃準(zhǔn)確水浴30min 后，立即放入95℃水浴5min（蓋緊，以防止

水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

試劑一 400

充分混勻，8000g，4℃，離心5min，取上清液

上清液 500 500

試劑三 1000 1000

充分混勻，室溫靜置2min 后， 400nm 處測定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A 測定管-A 對照管。每

個測定管需設(shè)一個對照管。

α-GC 活力計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/mL），y 為吸光

值。

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g 組織每分鐘產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min /g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.123×(ΔA +0.0027)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V 樣總：加入

提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌

總數(shù)，500 萬；T：反應(yīng)時間，30min。

上海信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
elisa試劑盒：進(jìn)口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清：胎牛血清,人血清,動物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對照品：進(jìn)口對照品,進(jìn)口對照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
放免試劑盒：進(jìn)口放免試劑盒，國產(chǎn)放免試劑盒，進(jìn)口美國鳳凰等知名品牌放免試劑盒。
實(shí)驗(yàn)室代測服務(wù)：放免代測，WB實(shí)驗(yàn)，免疫組化代測，熒光定量PCR代測，病理細(xì)胞染色代測，生化實(shí)驗(yàn)代測等。