實(shí)驗(yàn)室代測(cè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

人乙酰膽堿酯酶（AchE) 酶聯(lián) 免疫分析

點(diǎn)擊次數(shù)：872 發(fā)布時(shí)間：2019/8/13 9:36:33

· 上傳者：上海信帆生物科技有限公司

· 上傳時(shí)間：2019/8/13 9:36:33

· 文件大�。�176KB

· 文件類型：pdf

· 所屬分類：應(yīng)用方法

· 下載次數(shù)：205次

· 查看次數(shù)：872

· 資料簡(jiǎn)介：人乙酰膽堿酯酶（AchE) 酶聯(lián) 免疫分析
試劑盒使用說(shuō) 明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè) 范圍： 96T
40nmol/L -1200nmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中乙酰膽堿酯酶（AchE)含量。
實(shí) 驗(yàn) 原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人乙酰膽堿酯酶（AchE)水平。用純化的人乙酰
膽堿酯酶（AchE)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入乙酰膽堿
酯酶（AchE)，再與 HRP 標(biāo)記的乙酰膽堿酯酶（AchE)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體
復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸
的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰膽堿酯酶（AchE)呈正相關(guān)。用酶
標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人乙酰膽堿酯酶（AchE)
濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（2400nmol/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo) 本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
1200nmol/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
600nmol/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
300nmol/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150nmol/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
75nmol/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品*終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。